Método de Sanger
Ventajas
la lectura de ADN es larga con respecto a otros equipos.
Pose Limitaciones
Cantidad de reads baja con respecto a otros equipos.
Baja calidad de primeras 10-40 bases
el tiempo es extenso
costo
El tamaño de bases de datos es pequeña.
Preparacion
Fragmentación del Genoma.
Clonación de Fragmentos de un vector.
Secuenciación con ddNTP.
Resultados
Electroforesis
Espectrofotometría
Consiste en usar DNA como plantilla para secuenciar.
ddNTP (modificado)
Fluoróforo
Da un color determinando la terminación de la cadena.
Es detectado por láser de un capilar
Atraves de electroforesis capilar
es migración de moléculas de una muestra
de acuerdo a su tamaño
Posee un H
Terminación de la elongación de la nueva cadena
DNA polimerasa
Incorpora dNTP a la nueva cadena
dNTP
Posee un grupo OH
La unión a otro dNTP para la elongación de la nueva cadena.
Primer
Permite la elongación de una nueva cadena.